دانشگاه گیلان فیزیولوژی و بیوتکنولوژی آبزیان 2345-3966 9 3 2021 11 22 Increasing the solubility of recombinant Glutathione S-transferase from Rutilus kutum using chaperone-based method in Escherichia coli افزایش حلالیت آنزیم نوترکیب گلوتاتیون S- ترانسفراز استخراج شده از ماهی سفید (Rutilus kutum) با استفاده از روش مبتنی بر چپرون در باکتری Escherichia coli 89 108 5299 10.22124/japb.2021.18601.1409 FA سارا تراضی دانشجوی دکتری بیوشیمی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران حسین غفوری دانشیار گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران سجاد صاری خان مربی مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران، تهران، ایران ریحانه سریری استاد گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران Journal Article 2021 01 10 Attainment of soluble recombinant protein in high quantity is a critical demand in all types of biotechnology. Between the available general and protein-specific techniques used for enhancing the protein solubility, the co-expression of desired protein with molecular chaperones seems to be a proper solution to assist the folding of newly synthesized protein and reduce the inclusion bodies formation, however the effectiveness of different chaperones varies widely. In order to evaluate the efficiency of fish chaperones in increasing the solubility of recombinant proteins, cloning and simultaneous expression of <em>Esox lucius</em> Hsp70 (El-Hsp70) and the µ-class glutathione S-transferase from <em>Rutilus kutum</em> (Rk-GSTµ) was performed on <em>E. coli host</em>. In order to investigate the protein-protein interaction, the SDS-PAGE electrophoresis and measuring the specific activity of Rk-GSTµ was applied. Since the solubility and specific activity of Rk-GSTµ were increased in co-expressing cells, this work has provided another promising finding on the positive role of chaperones in enhancing the soluble content of expressed recombinant proteins. دستیابی به مقدار زیادی از پروتئین نوترکیب به صورت محلول یک نیاز اساسی و زیربنای بسیاری از پژوهش‌ها در تمام شاخه‌های بیوتکنولوژی است. به نظر می‌رسد بین روش‌های عمومی و اختصاصی موجود برای افزایش حلالیت پروتئین نوترکیب، بیان مشترک پروتئین مورد نظر با چپرون‌های مولکولی یک راه حل مناسب برای کمک به تا شدن صحیح پروتئین تازه سنتز شده و کاهش تجمعات پروتئینی باشد، با این حال اثربخشی چپرون‌های مختلف به طور گسترده‌ای متفاوت است. به منظور بررسی کارایی چپرون‌های ماهیان در افزایش حلالیت پروتئین‌های نوترکیب، در این مطالعه کلون‌سازی و بیان همزمان دو پروتئین Hsp70 مربوط به اردک‌ماهی <em>Esox lucius</em> (El-Hsp70) و گلوتاتیون S- ترانسفراز کلاس µ از ماهی سفید <em>Rutilus kutum</em> (Rk-GSTµ) در میزبان <em>E. coli</em> انجام شد و به منظور بررسی برهم‌کنش دو پروتئین از آنالیز الکتروفورز یک بعدی و محاسبه فعالیت ویژه آنزیم Rk-GSTµ استفاده شد. با توجه به این که حلالیت و فعالیت ویژه آنزیم Rk-GSTµ در سلول‌های بیان کننده نسبت به نمونه‌های کنترل افزایش یافت، این مطالعه یافته امیدوارکننده دیگری در مورد نقش مثبت چپرون‌ها در افزایش محتوای محلول پروتئین‌های نوترکیب فراهم کرده است. https://japb.guilan.ac.ir/article_5299_de782c609a1b4cb6049aa2fe614cfbab.pdf