شناسایی و تعیین خصوصیات ژن گلوتاتیون اس- ترانسفراز کلاس Mu در ماهی سفید دریای خزر (Rutilus frisii kutum)

احمدی, سلمان; غفوری, حسین; صاری خان, سجاد

doi:10.22124/japb.2018.6304.1124

شناسایی و تعیین خصوصیات ژن گلوتاتیون اس- ترانسفراز کلاس Mu در ماهی سفید دریای خزر (Rutilus frisii kutum)

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

¹ دانشجوی کارشناسی ارشد بیوشیمی، گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران

² استادیار گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه گیلان، رشت، ایران

³ مربی پژوهشی، بانک مولکولی، مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران، تهران، ایران

10.22124/japb.2018.6304.1124

چکیده

گلوتاتیون اس- ترانسفرازها (GSTs) یکی از آنزیمهای کلیدی فاز دوم متابولیسم داروها هستند که در سمزدایی سلولها و متابولیسم استرس اکسیداتیو پروکاریوتها و یوکاریوتها نقش دارند و این کار را از طریق اتصال گلوتاتیون احیا به گزنوبیوتیکها انجام میدهند. با توجه به نقش این آنزیمها در مقابله با آلودگیهای زیست محیطی و افزایش چشمگیر آلودگی دریای خزر در سال‌های اخیر، شناخت نقش و عملکرد این آنزیمها، ضروری به نظر میرسد. هدف از این پژوهش شناسایی، توالییابی و تعیین خصوصیت ایزوفرم Mu گلوتاتیون اس- ترانسفراز (GSTM) ماهیسفید دریای خزر است. مراحل استخراج RNA، ساخت cDNA تک‌رشتهای و تکثیر ژن GSTM در PCR انجام شد. سپس ژن مورد نظر درون حامل pTZ57R/T قرار گرفت. حامل نوترکیب، به روش ترانسفورماسیون شیمیایی به سلولهای مستعد E. coli DH5α انتقال یافت. پس از استخراج حامل و توالییابی نوکلئوتیدی، توالی GSTMبا 625 نوکلئوتید به دست آمد. نتایج حاصل از هم‌ردیفی، حاکی از همسانی بالای 89 درصد GSTM ماهی سفید با سایر گونه‌های خانواده کپورماهیان است که ناحیه N-terminal آن همسانی بالاتری را در مقایسه با ناحیه C-terminal نشان میدهد. بیشترین آمینواسید موجود در ساختار GSTM لیزین است که نقش کلیدی را در ساختار گلوتاتیون اس- ترانسفراز بازی میکند. توالی نوکلئوتیدی GSTM با شماره دسترسی KY211992 در پایگاه NCBI به ثبت رسید.

کلیدواژه‌ها