بیان نوترکیب، خالص سازی نسبی و ارزیابی خصوصیات بیوشیمیایی سرین پروتئاز قلیایی از سویه Salinivibrio proteolyticus AF-2004T جدا شده از دریاچه فوق شور بختگان

سیروس نیا, پریچهر; دلجو, علی; غفوری, حسین; صاری خان, سجاد

doi:10.22124/japb.2024.28131.1550

بیان نوترکیب، خالص سازی نسبی و ارزیابی خصوصیات بیوشیمیایی سرین پروتئاز قلیایی از سویه Salinivibrio proteolyticus AF-2004T جدا شده از دریاچه فوق شور بختگان

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

¹ دانشجوی دکتری بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه همدان، همدان، ایران.

² 2- دانشیار گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه همدان، همدان ، ایران

³ دانشگاه گیلان

⁴ مربی پژوهشی بانک DNA و داده های ژنومی، مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران، جهاد دانشگاهی، تهران، ایران.

10.22124/japb.2024.28131.1550

چکیده

پروتئازها به عنوان یکی از پرکاربردترین آنزیم های صنعتی در شکستن مولکول های پروتئین و تبدیل آن به پپتیدها و اسیدهای آمینه نقش دارند. سرین پروتئازها که جزو اندوپپتیدازها به حساب می آیند خود به چهار زیرگروه تقسیم می شوند که در میان آنها سرین پروتئازهای قلیایی از نظر صنعتی مهمترین گروه محسوب می شوند. در این مطالعه، ژن سرین متالوپروتئاز قلیایی از سویه Salinivibrio proteolyticus از دریاچه فوق شور بختگان مورد کلونینگ و بیان نوترکیب قرار گرفت. نتایج بدست آمده، تولید یک پروتئین منومر با وزن مولکولی حدود 66 کیلو دالتون را تایید کرد. نتایج این تحقیق نشانگر عدم تاثیر معنی دار پلاسمیدهای چاپرونی بر روی بیان محلول پروتئاز مورد مطالعه می باشد و حتی در صورت استفاده فرآیند تخلیص پروتئین را بدلیل وجود مقادیر بالای پروتئین های چاپرونی در فاز محلول مختل می نماید. سنجش فعالیت آنزیم به روش زایموگرافی و همچنین با محلول Folin-Ciocalteu نشان دهنده فعالیت پروتئازی آن بر روی سوبسترای کازئین بود. با مشاهده اثر مهارکنندگی EDTA با غلظت 1 میلی مولار به عنوان مهار کننده متالوپروتئازها و اثر کاهندگی فعالیت آنزیم در حضور PMSF با غلظت 1 میلی مولار به عنوان مهار کننده سرین پروتئازها چنین نتیجه گیری می شود که پروتئاز مورد بررسی به دسته سرین متالوپروتئازها تعلق دارد. همچنین، فعالیت پروتئولیتیکی آنزیم بر روی سوبسترای کازئین با غلظت 65/0 درصد، بر اساس نتایج اسپکتروفتومتر و با استفاده از منحنی استاندارد ال-تیروزین به میزان 08/0 ± 65/1 U/mg محاسبه شد. در نهایت می بایست برای دست یابی به فعالیت ویژه بهینه آنزیم ارزیابی شرایط مختلف واکنش مانند دما و pH بهینه و یونهای فلزی مطلوب آن مد نظر قرار گیرد.

کلیدواژه‌ها

موضوعات